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技术资讯
Technical Information李芙燕1 ,陈耀星1 3 ,王子旭1 ,王青丽1 ,呙于明2 ,张龙超2
(1. 中国农业大学动物医学院,北京100094 ,2. 中国农业大学动物科技学院,北京100094)
中图分类号:S816. 7 文献标识码:A 文章编号:100725038 (2006) 0220065204
摘 要:将20 只1 日龄健康AA 肉鸡随机分为4 个处理组:对照组(基础日粮) ,硫酸抗敌素组(基础日粮+ 硫酸抗敌素100 mg/ kg) ,幼康宝组(基础日粮+ 幼康宝500 mg/ kg) 和丁酸钠组(基础日粮+ 丁酸钠500 mg/ kg) 。试验7 周后,采用组织学技术,研究了肉鸡小肠肥大细胞的形态及数量分布。结果显示,①比较各试验组和对照组,小肠肥大细胞的形态没有明显的变化,多存在于肠腺周围和肠绒毛固有层。②各试验组的小肠肥大细胞数量均高于对照组(0. 1 %～30 %) ,而且在各试验组中又以丁酸钠组的肥大细胞数最多,硫酸抗敌素组次之,幼康宝组最少。③各试验组和对照组小肠肥大细胞数均从前向后逐渐减少,十二指肠的肥大细胞最多,空肠的次之,回肠的较少。3 种添加剂均可不同程度地促进肉鸡小肠肥大细胞的增殖,提高小肠黏膜免疫水平,并且丁酸钠的效果明显优于硫酸抗敌素和幼康宝。
关键词:饲料添加剂;肥大细胞;黏膜免疫;小肠;肉鸡
抗生素具有促进动物生长、预防病原微生物感染和疾病发生等方面的重要作用,而被作为饲料添加剂广泛应用于动物生产中。然而,随着抗生素的长期使用,人们逐渐发现使用抗生素存在的诸多负面效应,如动物产品中药物残留、病原菌的耐药性增加等。为了少用或不用抗生素作为饲料添加剂,许多科研工作者开始致力于抗生素替代品的研发。在此过程中人们发现饲料中添加中草药幼康宝可以防治疾病, 提高机体免疫力,促进畜禽生长,并且解决了抗生素、激素等药物添加剂无法解决的药物残留问题。另外,在畜禽日粮中添加酸化剂丁酸钠也可以促进动物生长,提高饲料转化率,改善动物肠道内微生物区系,以及调整动物肠道菌群的生态平衡,提高其机体免疫力。因此,中草药和酸化剂作为新的添加剂以替代抗生素已引起了人们的极大关注,但对于饲料添加剂幼康宝和丁酸钠的研究主要集中于对动物生长和生产的影响,而对肠道黏膜免疫影响的研究较少。为此,本试验拟研究幼康宝和丁酸钠对与肉鸡小肠黏膜免疫相关的肥大细胞的影响,并与硫酸抗敌素的作用相比较,从而为科学使用这两种饲料添加剂来替代抗生素硫酸抗敌素的可行性提供形态学依据。
1、材料与方法
1. 1 实验动物的分组与饲养
将20 只1 日龄健康AA 肉鸡随机分成4 组,即对照组(基础日粮) ,硫酸抗敌素组(基础日粮+ 硫酸抗敌素100 mg/ kg) ,幼康宝组(基础日粮+ 幼康宝500 mg/ kg) 和丁酸钠组(基础日粮+ 丁酸钠500mg/ kg) ,每组5 只。
硫酸抗敌素:市售,日本旭化成工业株式会社生产的硫酸黏杆菌素10 %预混剂,2001 年外兽药准字02 号;幼康宝:武汉泛华生物技术有限公司开发研制,主要成分为黄芩的有效成分的提取物;丁酸钠:由x新奥（厦门）农牧发展有限公司开发研制,主要成分为98 %的丁酸钠,批号:040807 。
开放式鸡舍单笼饲养,饲养期为7 周。各试验组的基础日粮相同,只是分别添加不同的饲料添加剂饲喂,其他饲养管理方法完全一致,即按北京爱拔益加家禽育种有限公司提供的《肉用仔鸡饲养管理
手册》进行饲养管理(表1) 。
1. 2 取材
将实验鸡放血处死,剖开腹腔,迅速取出十二指肠、空肠和回肠各5 cm 左右,用新配制的生理盐水洗干净,放入40 mL/ L 多聚甲醛磷酸缓冲液(0. 1mol/ L ,p H7. 4) 中固定48 h 。
1. 3 染色与数据处理
常规石蜡包埋,连续横断切片,厚6 μm。放入用蒸馏水煮沸配制的8 g/ L 甲苯胺蓝和6 mL/ L 高锰酸钾混合液中浸染约30 s ,蒸馏水洗两次后,用900 mL/ L 酒精分色(显微镜下控制) ,1 000 mL/ L酒精脱水,二甲苯透明,中性树脂封片。光镜下观察肥大细胞的形态及其分布,统计各段小肠横断面全层肥大细胞的数量。应用SAS 8. 2 软件包(SAS In2stit ute , 2001) 对统计的数据进行多重比较。
2、结果
2. 1 肥大细胞的形态
经甲苯胺蓝染色后,肥大细胞呈紫红色;形状多样,有圆形、椭圆形或梭形,大小不一。胞浆内颗粒丰满,部分细胞呈脱颗粒状。各试验组肥大细胞的形态未见有明显差异(图1) 。
2. 2 肥大细胞的分布特征
各试验组小肠的肥大细胞多存在于肠腺周围。小肠绒毛也有肥大细胞分布,但多位于固有层中,且按小肠绒毛底部、中部、顶部依次减少。少量肥大细胞分布于肌层和浆膜层,常见于小血管和小淋巴管周围。
2. 3 肥大细胞的数量
各组鸡各小肠肥大细胞,数量见表2 。从表2 中可以看出,各组肥大细胞的数量经数据处理存在有差异。在十二指肠,丁酸钠组的肥大细胞数最多,对照组最少,且丁酸钠组细胞数显著大于对照和幼康宝两组,但与硫酸抗敌素组差异不显著。在空肠和回肠,丁酸钠组的肥大细胞数量最多,并且显著大于其他3 组,但空肠对照组、硫酸抗敌素组和幼康宝组之间没有显著性差异,而在回肠中硫酸抗敌素组,肥大细胞数量显著大于对照和幼康宝两组,但对照与幼康宝组之间差异不显著。
比较同一组别的不同肠段的肥大细胞数量变化如图2 所示。各试验组中肥大细胞的数量变化趋势基本一致,且表现为从十二指肠到回肠肥大细胞数量逐渐减少。
3 、讨论
肠道不仅是消化、吸收营养物质的场所,而且具有重要的免疫功能。由于在肠道内多种微生物形成菌丛,而肠道允许这些微生物共存的同时,可以识别侵入的有害微生物以及被黏膜上皮吸收的异己物质,并加以排除,因而肠道黏膜免疫是机体防止感染的第一道防线。肠道黏膜屏障包括机械屏障和免疫学屏障等,后者主要由肠黏膜吸收上皮细胞和肠道相关细胞构成。肠道相关黏膜免疫细胞包括淋巴细胞、杯状细胞、肥大细胞等,其中肥大细胞是天然免疫的效应细胞之一,不仅在天然免疫中发挥重要作用,是机体抗感染免疫的第一线细胞,而且能通过所分泌的细胞因子参与获得性免疫,所以肥大细胞是重要的免疫活性细胞。有报道指出,肠道中的肥大细胞对肠道疾病有一定的防御作用,肠道黏膜上皮首先对入侵的细菌发生反应,从而激活邻近的肥大细胞产生放大效应。
本试验在饲料中加入不同的添加剂后,发现不同程度地促进肉鸡小肠肥大细胞的数量增加,而且丁酸钠的影响最大,可显著增加十二指肠、空肠以及回肠的肥大细胞数量,分别比对照组增加了19. 7 %,27. 2 %和30. 7 %;硫酸抗敌素也可增加肥大细胞的数量,比对照组的十二指肠、空肠和回肠的肥大细胞数量分别增加了13. 2 % ,4. 6 %和20. 6 %;而幼康宝对肉鸡小肠肥大细胞的影响不如丁酸钠和硫酸抗敌素的明显,比对照组的十二指肠、空肠和回肠肥大细胞数量仅分别增加了3. 0 % ,0. 07 %和2. 6 %。这说明了丁酸钠可显著提高肉鸡小肠肥大细胞数量,改善肠黏膜免疫水平,其效果优于硫酸抗敌素和幼康宝。
本试验还发现肥大细胞的数量从十二指肠、空肠和回肠的顺序逐渐减少。有试验表明在小鼠消化道中空肠的肥大细胞数量也多于回肠的肥大细胞数量,与本研究结果类似。但是,肥大细胞这种分布特点的生理意义还有待于进一步研究。
4、结论
在饲料中添加500 mg/ kg 的丁酸钠、100 mg/ kg的硫酸抗敌素和500 mg/ kg 的幼康宝后,均可增加肉鸡小肠肥大细胞数量,提高肉鸡小肠黏膜免疫的水平,而且丁酸钠的效果明显好于添加硫酸抗敌素和幼康宝,所以丁酸钠在一定程度上具有替代饲用抗生素添加剂的可行性。
